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          转基因元件NtQPT1启动子LAMP试剂盒

          转基因元件NtQPT1启动子LAMP试剂盒

          产品时间:2020-08-05

          访问量:146

          厂商性质:经销商

          生产地址:进口、国产

          简要描述:
          转基因元件NtQPT1启动子LAMP试剂盒低温运输,-20℃保存,保存期限为12个月。阳性对照需要因易污染其他成分需要单独放置。本产品不提供活体样品做阳性对照,只提供DN段作为阳性对照。
          品牌其他品牌CAS详见说明书
          分子式详见说明书纯度详见说明书
          分子量详见说明书货号GOYP63868
          规格50次供货周期现货
          主要用途公司产品仅用于科研应用领域化工

          产品优势:
          1.产品仅用于科研随时可用。
          2.优化的缓冲液可增强特异性并减少引物二聚体的形成。
          3.高灵敏度,特异性和可靠性。
          4.为不同的qPCR仪器提供了被动参考染料。

          产品名称 转基因元件NtQPT1启动子LAMP试剂盒
          英文名称 Lamp kit for promoter of transgenic element ntqpt1
          规格 50次

          储存条件:
          仅用于科研14℃或-20℃样品收集、处理及保存方法
          1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
          2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
          3. 细胞上清液:3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
          4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
          5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

          使用方法:
          一、稀释 PCR 阳性对照(以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例)
          1. 注意:由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体样品做阳性对照,只提供可以直接使用的 DN段作为阳性对照。
          2. 标记 6 个离心管,分别为 7,6,5,4,3,2。
          3. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 模板稀释液(用带芯枪头,下同)。
          4. 在 7 号管中加入 5 μL 1×10E8 拷贝/μL 的阳性对照,充分震荡 1 分钟,得1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
          5. 换枪头,在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
          6. 换枪头,在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照到 5 号管中,充分震荡 1 分钟,得 1×10E5 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
          7. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的阳性对照。放冰上待用。

          实验过程:
          一、试剂准备
          1. DNA模板
          2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
          3.10×PCR Buffer
          4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
          5.Taq酶
          二、操作步骤
          1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
          10×PCR buffer             5μl
          dNTP mixl                 4μl
          引物1(10pM)               2μl
          引物2(10PM)              2μl
          Taq酶(2U/μl)            1μl
          DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
          加ddH2O至               50 μl
          视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
          2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,后在72℃ 保温7min。
          3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
          4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
          三、注意事项
          1.PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行。设立一个的PCR实验室。
          2.纯化模板所选用的方法对污染的风险有影响。一般而言,只要能够得到可靠的结果,纯化的方法越简单越好。
          3.所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
          4.PCR试剂配制应使用高质量的新鲜双蒸水,采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
          5.试剂都应该以大体积配制,试验一下是否满意,然后分装成仅够一次使用的量储存,从而确保实验与实验之间的连续性。
          6.试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
          7.PCR的样品应在冰浴上化开,并且要充分混匀。

          LAYN Others Human Layilin 人细胞裂解液 (阳性对照) 硫酸钙(>99%,BR)质量规格:>99%,BRCalcium sulfate, anhydrous

          CM-H084人脐静脉平滑肌细胞完全培养基100mL二环己基碳二亚胺(>99%,BR)质量规格:>99%,BRDCC, Dicyclohexylcarbodiimide

          SERPINI1 Others Mouse 小鼠 SerpinI1 / Neuroserpin 人细胞裂解液 (阳性对照) 丁二酸二甲酯(>99%,BR)质量规格:>99%,BRDimethyl succinate

          小鼠角膜上皮细胞完全培养基 100mL二甲基甲酮钠盐(>97%,BR)质量规格:>97%,BRDimethylglyoxime  salt

          L6565小鼠白血病克隆细胞系 L6565 murine leukemia cell line RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS直接蓝71(50%,BR)质量规格:≥50%,BRDirect blue 71

          软骨细胞Many types of cells包装:5 × 105(1ml)N-苯甲酰-2'-脱氧胞苷质量规格:>98%,BRbz-dC

          MAP3K8 Others Human TPL2 / MAP3K8 / MEKK8 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) N6-苯甲酰-2'-脱氧腺苷质量规格:>98%,BRbz-dA

          KM小鼠子瘤株;U145'-O-三苯甲基尿苷质量规格:>97%,BRTrt-rU

          NIH/3T3细胞,胚胎成纤维细胞 人高转移肝癌细胞,LM3细胞 CL-0104HEp-2(人喉表皮样癌细胞)5×106cells/瓶×2Trt-dU质量规格:>98%,BRTrt-dU

          叙利亚仓鼠肾细胞;BHK-21N2-洛沙坦-洛沙坦(洛沙坦杂质)质量规格:美国进口N2-Losartanyl-losartan (Losartan Impurity)

          SV40转化的非洲绿猴肾细胞;COS-1 膀胱变移细胞癌,T-24细胞 U251(胶质瘤细胞)Murexide基紫色酸1BS

          EB病毒转化的人B细胞;KMY09275,5`-二流双(2-肖基本加醋) 3-Ccrboxy-4-nitnophqnyl disulfidq 69-78-3

          EFNB2 Others Mouse 小鼠 EFNB2 / EphrinB2 人细胞裂解液 (阳性对照) Manganesechloride录化亚锰5BR99%

          CM-R101大鼠脑动脉血管平滑肌细胞完全培养基100mLBT四唑蓝500毫克超,50mg/ml,有害品

          HEXB Others Human Hexosaminidase B / HEXB 人细胞裂解液 (阳性对照) 302-84-1DL-丝酸;DL-蚕丝基酸;DL-2--3-羟基酸;DL-β-羟基酸DL-Serine;DL-2-AMino-3-xy7noxypropionic acid;DL-β-xy7noxyalanine;(±)-2-AMino-3-xy7noxypropionic acid; DL-3-xy7noxy-α-alanine

          人整合SV40基因的上皮细胞;HBL-100 [HBL100]铌标准溶液(1000μg/ml)Niobium standard质量规格:1000μg/ml

          DNASE1 Others Human DNASE1 / Deoxyribonuclease I / DNL1 人细胞裂解液 (阳性对照) 镍标准溶液(100μg/mL,基体:1%HNO3)Nickel Standard质量规格:100μg/mL,基体:1%HNO3

          CL-0384MDA-MB-468-06(人癌细胞)5×106cells/瓶×2钾标准溶液(500mg/L,溶剂:水)Potassium standard质量规格:500mg/L,溶剂:水

          Mv1Lu细胞,貂肺上皮细胞 人红白细胞白血病细胞,HEL细胞 人皮肤成纤维细胞;HSAS4钾标准溶液(1000µg/mL,基体:1%HCl) Potassium Solution质量规格:1000µg/mL,基体:1%HCl

          鲤鱼尾鳍细胞;YZ16镨标准溶液(1000μg/ml)Praseodymium standard质量规格:1000μg/ml

          PCR实验步骤:

          ①取冻存已裂解的细胞,室温放置5分钟使其完全溶解。
          ②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的lvfang,盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后,15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚lvfang相,中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。
          ③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA,混匀后15到30℃孵育10分钟后,于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。
          ④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀。混匀后,4℃下7000rpm离心5分钟。
          转基因元件NtQPT1启动子LAMP试剂盒⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。
          ⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时,先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次,使其完全溶解,获得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法测定先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释(1:100)后,读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值,测定RNA溶液 浓度和纯度。

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