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          转基因元件CaMV35终止子LAMP试剂盒

          转基因元件CaMV35终止子LAMP试剂盒

          产品时间:2020-08-05

          访问量:74

          厂商性质:经销商

          生产地址:进口、国产

          简要描述:
          转基因元件CaMV35终止子LAMP试剂盒低温运输,-20℃保存,保存期限为12个月。阳性对照需要因易污染其他成分需要单独放置。本产品不提供活体样品做阳性对照,只提供DN段作为阳性对照。
          品牌其他品牌CAS详见说明书
          分子式详见说明书纯度详见说明书
          分子量详见说明书货号GOYP63860
          规格50次供货周期现货
          主要用途公司产品仅用于科研应用领域化工

          产品优势:
          1.产品仅用于科研随时可用。
          2.优化的缓冲液可增强特异性并减少引物二聚体的形成。
          3.高灵敏度,特异性和可靠性。
          4.为不同的qPCR仪器提供了被动参考染料。

          产品名称 转基因元件CaMV35终止子LAMP试剂盒
          英文名称 Lamp kit for terminator of transgenic element camv35
          规格 50次

          储存条件:
          仅用于科研14℃或-20℃样品收集、处理及保存方法
          1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
          2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
          3. 细胞上清液:3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
          4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
          5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

          使用方法:
          一、稀释 PCR 阳性对照(以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例)
          1. 注意:由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体样品做阳性对照,只提供可以直接使用的 DN段作为阳性对照。
          2. 标记 6 个离心管,分别为 7,6,5,4,3,2。
          3. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 模板稀释液(用带芯枪头,下同)。
          4. 在 7 号管中加入 5 μL 1×10E8 拷贝/μL 的阳性对照,充分震荡 1 分钟,得1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
          5. 换枪头,在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
          6. 换枪头,在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照到 5 号管中,充分震荡 1 分钟,得 1×10E5 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
          7. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的阳性对照。放冰上待用。

          实验过程:
          一、试剂准备
          1. DNA模板
          2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
          3.10×PCR Buffer
          4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
          5.Taq酶
          二、操作步骤
          1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
          10×PCR buffer             5μl
          dNTP mixl                 4μl
          引物1(10pM)               2μl
          引物2(10PM)              2μl
          Taq酶(2U/μl)            1μl
          DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
          加ddH2O至               50 μl
          视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
          2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,后在72℃ 保温7min。
          3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
          4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
          三、注意事项
          1.PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行。设立一个的PCR实验室。
          2.纯化模板所选用的方法对污染的风险有影响。一般而言,只要能够得到可靠的结果,纯化的方法越简单越好。
          3.所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
          4.PCR试剂配制应使用高质量的新鲜双蒸水,采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
          5.试剂都应该以大体积配制,试验一下是否满意,然后分装成仅够一次使用的量储存,从而确保实验与实验之间的连续性。
          6.试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
          7.PCR的样品应在冰浴上化开,并且要充分混匀。

          LLC-MK2 恒河猴肾细胞钯粉(>99%,BR)质量规格:>99%,BRPalladium, powder

          CM-H027人成纤维细胞完全培养基100mL乙酸副品红(>85%,BS)质量规格:>85%,BSPararosaniline acetate

          SKOV3/Taxol-25, 人卵巢癌紫杉醇耐药细胞株钙激活钾通道阻断剂来源于覃青霉质量规格:>98%,BC Paxilline*, from Penicillium paxilli

          人骨肉瘤细胞;U-2 OS [U2OS;U2-OS;U-2OS] 大鼠肺血管平滑肌细胞完全培养基 100mL青霉酸(>98% (HPLC),BC)质量规格:>98% (HPLC),BCPenicillic acid

          子宫内膜上皮细胞Many types of cells包装:5 × 105(1ml)硝酸奥昔康唑(标准品)质量规格:HPLC法含量测定Oxiconazole Nitrate

          人胰腺癌细胞;AsPC-1甲基-α-D-半乳糖苷100

          VSIG4 Others Mouse 小鼠 VSIG4 人细胞裂解液 (阳性对照) 流吩嗪(-20) 5-Mqthylphqnczinium mqthosulfctq 1999/11/6

          人胚肺二倍体细胞;KMB-17IMIDAZOLECHROMA.BUFFER,5X,PH7.0咪唑层析缓冲液蛋白组学级100MLCOLD

          AGT Others Mouse 小鼠 AGT / SerpinA8 人细胞裂解液 (阳性对照) 三乙酸100毫克保存:-20

          NCI-H1975 人肺腺癌细胞(化啶)

          PCSK9 Others Human PCSK9 / NARC1 人细胞裂解液 (阳性对照) xy7noinoneone氢醌50ACS99%

          CM-R116大鼠视网膜色素上皮细胞完全培养基100mL鱼藤酮 Rotenone,95% 83-79-4 1G 通用试剂

          HA Others H9N2 甲型流感 H9N2 (A/Chicken/Hong Kong/G9/97) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人细胞裂解液 (阳性对照) 拂轻缩 Flurcndrqnolidq 124-88-2

          小鼠肾成纤维细胞完全培养基 100mL加拿大树香脂,英文名或英文缩写:Canada balsam,级别:高,98%,规格:1

          P3/NSI/1-Ag4-1 [NS-1]小鼠骨髓瘤细胞 P3/NSI/1-Ag4-1 mouse myeloma cell line [NS-1] DMEM培养基+10%FBS硅酮 OV-101SILICONE OV-101

          草鱼肾细胞;GIK柠檬苦素,黄柏内酯(橙皮提取) Limonin质量规格:HPLC98%,橙皮提取

          615小鼠滑膜肉瘤瘤株;ZM755 小鼠膀胱平滑肌细胞完全培养基 100mL硬脂酸(50%)Stearic acid质量规格:含量50%,药用级

          mRTEC, 小鼠肾小管上皮细胞 Mouse硬脂酸(98%)Stearic acid质量规格:含量98%,药用级

          EPCAM Others Mouse 小鼠 EpCAM / OP1 / CD326 人细胞裂解液 (阳性对照) 牛蒡苷元(标准品)Arctigenin质量规格:HPLC98%,标准品

          人正常上皮细胞;MCF 10A牛蒡子苷(标准品)Arctiin质量规格:HPLC98%,标准品

           PCR实验步骤:

          ①取冻存已裂解的细胞,室温放置5分钟使其完全溶解。
          ②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的lvfang,盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后,15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚lvfang相,中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。
          ③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA,混匀后15到30℃孵育10分钟后,于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。
          转基因元件CaMV35终止子LAMP试剂盒④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀。混匀后,4℃下7000rpm离心5分钟。
          ⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。
          ⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时,先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次,使其完全溶解,获得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法测定先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释(1:100)后,读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值,测定RNA溶液 浓度和纯度。

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