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          大鼠胎儿真皮成纤维细胞保存

          大鼠胎儿真皮成纤维细胞保存

          产品时间:2020-07-22

          访问量:137

          厂商性质:经销商

          生产地址:进口、国产

          简要描述:
          保存和应用:客户可以根据自己的需求选择新鲜或者冻存的原代细胞,如是新鲜原代细胞,客户收到大鼠胎儿真皮成纤维细胞保存后应立即将其放入CO2细胞培养箱内静置后2-3h,再进行后续的实验操作。
          品牌其他品牌CAS详见说明书
          分子式详见说明书纯度详见说明书
          分子量详见说明书货号GOY-Y3457
          规格5×105/瓶供货周期现货
          主要用途公司产品仅用于科研应用领域化工

          以下是订购信息:

          产品名称英文名称货号
           大鼠胎儿真皮成纤维细胞保存 Rat Embryo: Normal Fetal Dermal Fibroblasts GOY-Y3457

          大鼠胎儿真皮成纤维细胞【Rat Embryo: Normal Fetal Dermal Fibroblasts
               产品描述:公司提供的原代细胞均来自新鲜组织,公司提供的大鼠原代细胞均来自新鲜组织,用于培养该细胞的组织采集是根据标准方案进行。细胞的培养采用公司PrimaCellTM原代细胞培养试剂盒来优化目的细胞生长条件,以降低杂细胞的污染,同时保证质量的稳定。在公司生物技术部标准的操作流程下,原代细胞可以保持分化状态,进而可以用于评估体外药物模型系统和调节特定基因的遗传功能。产品仅供科研
           冷冻保存细胞之方法?
          冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ (-20 ℃30 分钟*) → -80 ℃16~18 小时(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 长期储存。
          冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase长期储存。*-20 ℃不可超过1 小时, 以防止冰晶过大,造成细胞大量死亡,亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。

           

          培养操作:
          1)复苏细胞:将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻,加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟,弃去上清液,补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜(或将 细胞悬液加入 10cm 皿中,加入约 8ml 培养基,培养过夜)。第二天换液并 检查细胞密度。
          2)细胞传代:如果细胞密度达 80%-90%,即可进行传代培养。      
          1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
          2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分 变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。  
          3. 按 6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟,弃去上清液,补加 1-2mL 培养液后吹匀。
          4. 将细胞悬液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
          3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类;
          1. 细胞冻存时,弃去培养基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶,细胞变圆 脱 落后,加入 1ml 含血清的培养基终止消化,可使用血球计数板计数。
          2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞,根据细胞数量加 入血 清和 DMSO,轻轻混匀,DMSO 终浓度为 10%,细胞密度不低于1x106/ml,每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液,注意冻 存管做好标识。
          3. 将冻存管置于程序降温盒中,放入-80 度冰箱,2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
          细胞培养操作规程:
          一.培养基及培养冻存条件准备:
          1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号21875-091),90%;优质胎牛血清,10%。
          2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。
          3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。
          二.细胞处理:
          1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
          2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
          对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
          方法一:收集细胞,1000RPM,常温条件下离心5分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
          下列是公司正在促销产品:

          小鼠血纤蛋白原(Fbg)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装  Minoxidil  中文名:米诺地尔  分子式:C9H15N5O 

          小鼠血纤蛋白原(Fbg)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Minocycline   中文名:  分子式:C23H28ClN3O7  度:98.0%

          小鼠血栓烷B2(mouse TXB2)   作用:   ELISA   规格:   48T/96T   进口分装     Neutral berberine sulfate  316-41-6  中文名:硫酸黄连素  分子式:C20H20NO8S 

          小鼠血栓调节蛋白(TM)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装  Minisecolide C  中文名:  分子式:C28H34O7  度:%

          小鼠血栓调节蛋白(mouse TM)   作用:   ELISA   规格:   48T/96T   进口分装  Miconazole nitrate  中文名:硝酸咪康唑  分子式:C18H15Cl4N3O4  度:98.0%

          小鼠层连蛋白elisa试剂盒   小鼠层连蛋白试剂盒   规格型号:96T/48T   小鼠层连蛋白试剂盒,规格型号:96T/48T,来源:elisa试剂盒(进口分装),产品别名:小鼠层连蛋白试剂盒、小鼠层连蛋白eisa试剂盒   保存条件:2-8   保质期:6个月。     Drospirenone  67392-87-4  中文名:屈螺酮  分子式:C24H30O3 

          小鼠层连蛋白/板层素(LN)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装  Cinnamyl 3-aminobut-2-enoate  中文名:  分子式:C13H15NO2  度:98.0%

          小鼠层连蛋白/板层素(LN)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Cinnamyl 3-aminobut-2-enoate  113898-97-8  中文名:  分子式:C13H15NO2  度:98.0%  关键词: 

          小鼠补体因子H(CFH)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装           Cinnamyl 3-aminobut-2-enoate  中文名:  分子式:C13H15NO2 

          小鼠补体片断elisa试剂盒   小鼠补体片断试剂盒   规格型号:96T/48T   小鼠补体片断试剂盒,规格型号:96T/48T,来源:elisa试剂盒(进口分装),产品别名:小鼠补体片断试剂盒、小鼠补体片断eisa试剂盒   保存条件:2-8   保质期:6个月。  Ciprofloxacin   中文名:盐酸环丙沙星  分子式:C17H19ClFN3O3  度:98.0%

          兔白细胞介素35elisa试剂盒   兔白细胞介素35试剂盒   规格型号:96T/48T   兔白细胞介素35试剂盒,规格型号:96T/48T,来源:elisa试剂盒(进口分装),产品别名:兔白细胞介素35试剂盒、兔白细胞介素35 elisa试剂盒   保存条件:2-8   保质期:6个月。  4-Biphenylcarboxylic acid  中文名:4-苯基苯甲酸  分子式:C13H10O2  度:98.0%

          兔白细胞介素-35IL-35ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装  4β-Hydroxywithanolide E  中文名:4β-羟基醉茄内酯分子式:C28H38O8  度:98.0%

          兔白细胞介素-35IL-35ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装           4β-Hydroxywithanolide E  中文名:4β-羟基醉茄内酯分子式:C28H38O8 

          兔白细胞介素1elisa试剂盒   兔白细胞介素1试剂盒   规格型号:96T/48T   兔白细胞介素1试剂盒,规格型号:96T/48T,来源:elisa试剂盒(进口分装),产品别名:兔白细胞介素1试剂盒、兔白细胞介素1elisa试剂盒   保存条件:2-8   保质期:6个月。     4-Biphenylcarboxylic acid  中文名:4-苯基苯甲酸  分子式:C13H10O2 

          兔白细胞介素15elisa试剂盒   兔白细胞介素15试剂盒   规格型号:96T/48T   兔白细胞介素15试剂盒,规格型号:96T/48T,来源:elisa试剂盒(进口分装),产品别名:兔白细胞介素15试剂盒、兔白细胞介素15elisa试剂盒   保存条件:2-8   保质期:6个月。  4-Biphenylcarboxylic acid  92-92-2  中文名:4-苯基苯甲酸  分子式:C13H10O2  度:98.0%

          Terbinafine   78628-80-5  中文名:盐酸特比萘芬  分子式:C21H26ClN  度:98.0%  关键词:    小鼠乙型肝炎e抗体(HBeAb)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

          Terbinafine  91161-71-6  中文名:特比萘芬  分子式:C21H25N  度:98.0%  关键词:    小鼠乙酰胆碱转移酶(CHATELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装        

          Tenuifoliside A  139726-35-5  中文名:远志蔗糖酯分子式:C31H38O17  度:95.0%  关键词:  抗抑郁; 远志; 蔗糖; 中药对照品; 中药标准品; 植物提取物; 天然产物; 天然产物库  小鼠乙型肝炎e抗体(HBeAb)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

          Tenofovir  147127-20-6  中文名:泰诺福韦  分子式:C9H14N5O4P  度:98.0%  关键词:    小鼠乙型肝炎e抗原(HBeAg)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

          Tenacissoside I  191729-44-9  中文名:通关藤苷分子式:C44H62O14  度:关键词:  通关藤; 孕甾烷; 植物提取物; 天然产物; 天然产物库  小鼠乙型肝炎表面抗体(HBsAb)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

          实验报告:

          一、分离与培养:
              1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,后将组织剪成1mm3左右大小;
              2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
              3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织完全被消化;
              4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
              5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
          大鼠胎儿真皮成纤维细胞保存二、免疫荧光鉴定:
              1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;
              2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
              3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
              4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
              5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;
              6、用PBS冲洗3次,每次10min,后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

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