大鼠晶状体上皮细胞说明书

以下是订购信息：

大鼠晶状体上皮细胞【Rat Eye: Normal Lens Epithelial Cells】
     产品描述：公司提供的原代细胞均来自新鲜组织，公司提供的大鼠原代细胞均来自新鲜组织，用于培养该细胞的组织采集是根据标准方案进行。细胞的培养采用公司PrimaCellTM原代细胞培养试剂盒来优化目的细胞生长条件，以降低杂细胞的污染，同时保证质量的稳定。在公司生物技术部标准的操作流程下，原代细胞可以保持分化状态，进而可以用于评估体外药物模型系统和调节特定基因的遗传功能。
 冷冻保存细胞之方法？
冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ （-20 ℃30 分钟*） → -80 ℃16~18 小时（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 长期储存。
冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase长期储存。*-20 ℃不可超过1 小时， 以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

 

实验报告：

一、分离与培养：产品仅供科研
    1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，后将组织剪成1mm3左右大小；
    2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
    3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织完全被消化；
    4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
    5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
二、免疫荧光鉴定：
    1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；
    2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
    3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
    4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
    5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；
    6、用PBS冲洗3次，每次10min，后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

下列是公司正在促销产品：

小鼠血小板生长因子(mouse PDGF)   作用：   ELISA   规格：   48T/96T   进口分装  Mefenamic acid  中文名：甲灭酸  分子式：C15H15NO2 

小鼠血小板生长因子   英文名称：   plateler-derived growth factor   规格：   48T/96T   英文缩写：   PDGF  m-Nitrohydrocinnamic acid  1664-57-9  中文名：  分子式：C9H9NO4  度：98.0%  关键词： 

小鼠血小板生成素(TPO)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装  Momor-cerebroside I  中文名：  分子式：C48H93NO10 

小鼠血小板生成素(mouse TPO)   作用：   ELISA   规格：   48T/96T   进口分装  Neritaloside  中文名：  分子式：C32H48O10 

小鼠血小板生成素   英文名称：   Thromboietin   规格：   48T/96T   英文缩写：   TPO  Ethyl 2-(3-cyano-4-isobutoxyphenyl)-4-methyl-5-thiazolecarboxylate  160844-75-7  中文名：  分子式：C18H20N2O3S  度：98.0%  关键词：

小鼠雌二醇(E2)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Citreorosein  481-73-2  中文名：ω-羟基大黄素  分子式：C15H10O6  度：97.0%  关键词：  cAMP磷酸二酯酶抑制剂; ; 大黄属; 中药对照品; 中药标准品; 植物提取物; 天然产物; 天然产物库

小鼠垂体腺苷酸环化酶激活肽elisa试剂盒   小鼠垂体腺苷酸环化酶激活肽试剂盒   规格型号：96T/48T   小鼠垂体腺苷酸环化酶激活肽试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：小鼠垂体腺苷酸环化酶激活肽试剂盒、小鼠垂体腺苷酸环化酶激活肽eisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。  cis-Octahydro-isoindole  21850-12-4  中文名：  分子式：C8H15N  度：98.0%  关键词： 

小鼠垂体腺苷酸环化酶激活肽(PACAP)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Nandrolone undecylate  中文名：十一酸诺龙  分子式：C29H46O3 

小鼠垂体腺苷酸环化酶激活肽(PACAP)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Bisdemethoxycucurmin  中文名：双去甲氧基姜黄素  分子式：C19H16O4  度：98.0%

小鼠穿孔素/成孔蛋白(PF/PFP)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装           Citreorosein  中文名：ω-羟基大黄素  分子式：C15H10O6

兔儿茶酚胺EAelisa试剂盒   兔儿茶酚胺EA试剂盒   规格型号：96T/48T   兔儿茶酚胺EA试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：兔儿茶酚胺EA试剂盒、兔儿茶酚胺EAelisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。  4-Chlorodehydromethyltestosterone  2446-23-3  中文名：4-氯去氢甲基睾酮  分子式：C20H27ClO2  度：98.0%  关键词： 

兔儿茶酚胺(CA)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装  4-Difluoromethoxy-3-hydroxybenzaldehyde  中文名：  分子式：C8H6F2O3  度：98.0%

兔儿茶酚胺(CA)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  4-Chloro-6-iodoquinazoline  98556-31-1  中文名：  分子式：C8H4ClIN2  度：98.0%  关键词： 

兔蛋白激酶A   英文名称：   Rabbit Protein Kinase A   规格：   48T/96T   英文缩写：   PKA  4-Hydroxysapriparaquinone  中文名：  分子式：C20H26O4 

兔单核细胞趋化蛋白-1(rabbit MCP-1)   作用：   ELISA   规格：   48T/96T   进口分装  4-Methylamino-3-nitrobenzoic acid  41263-74-5  中文名：  分子式：C8H8N2O4

Testosterone benzoate  中文名：17-安息香酸雄烯醇酮  分子式：C26H32O3    γ-谷酰半胱酸合成酶（γ-GCS）测定试剂盒（速率法）

Testosterone acetate  中文名：醋酸睾酮  分子式：C21H30O3    超微量ATP酶测试盒（Na+K+、Ca2+Mg2+、T－ATP酶）

Testosterone  中文名：睾酮  分子式：C19H28O2    总巯基（-SH）测定试剂盒                 

tert-Butyl4'-(bromomethyl)biphenyl-2-carboxylate  中文名：  分子式：C18H19BrO2    蔗糖合成酶（SS)测试盒   可见分光光度法   50管/48样

tert-Butyl rosuvastatin  中文名：  分子式：C26H36FN3O6S    蔗糖0酸合成酶（SPS)测试盒   可见分光光度法   50管/48样

培养操作：

1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜（或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并 检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。      
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分 变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。  
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；
1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，细胞变圆 脱 落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。
2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞，根据细胞数量加 入血 清和 DMSO，轻轻混匀，DMSO 终浓度为 10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液，注意冻 存管做好标识。
大鼠晶状体上皮细胞说明书3. 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。