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          大鼠脉络膜血管细胞保存

          大鼠脉络膜血管细胞保存

          产品时间:2020-07-22

          访问量:99

          厂商性质:经销商

          生产地址:进口、国产

          简要描述:
          大鼠脉络膜血管细胞保存在实验过程中,根据要求可始终保持细胞活力,并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况,包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
          品牌其他品牌CAS详见说明书
          分子式详见说明书纯度详见说明书
          分子量详见说明书货号GOY-Y3453
          规格5×105/瓶供货周期现货
          主要用途公司产品仅用于科研应用领域化工

          以下是订购信息:

          产品名称英文名称货号
           大鼠脉络膜血管细胞保存 Rat Choroid: Normal Choroidal Vascular Cells GOY-Y3453

          大鼠脉络膜血管细胞【Rat Choroid: Normal Choroidal Vascular Cells
               产品描述:公司提供的原代细胞均来自新鲜组织,公司提供的大鼠原代细胞均来自新鲜组织,用于培养该细胞的组织采集是根据标准方案进行。细胞的培养采用公司PrimaCellTM原代细胞培养试剂盒来优化目的细胞生长条件,以降低杂细胞的污染,同时保证质量的稳定。在公司生物技术部标准的操作流程下,原代细胞可以保持分化状态,进而可以用于评估体外药物模型系统和调节特定基因的遗传功能。产品仅供科研
           冷冻保存细胞之方法?
          冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ (-20 ℃30 分钟*) → -80 ℃16~18 小时(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 长期储存。
          冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase长期储存。*-20 ℃不可超过1 小时, 以防止冰晶过大,造成细胞大量死亡,亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。

           

          培养操作:
          1)复苏细胞:将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻,加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟,弃去上清液,补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜(或将 细胞悬液加入 10cm 皿中,加入约 8ml 培养基,培养过夜)。第二天换液并 检查细胞密度。
          2)细胞传代:如果细胞密度达 80%-90%,即可进行传代培养。      
          1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
          2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分 变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。  
          3. 按 6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟,弃去上清液,补加 1-2mL 培养液后吹匀。
          4. 将细胞悬液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
          3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类;
          1. 细胞冻存时,弃去培养基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶,细胞变圆 脱 落后,加入 1ml 含血清的培养基终止消化,可使用血球计数板计数。
          2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞,根据细胞数量加 入血 清和 DMSO,轻轻混匀,DMSO 终浓度为 10%,细胞密度不低于1x106/ml,每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液,注意冻 存管做好标识。
          3. 将冻存管置于程序降温盒中,放入-80 度冰箱,2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
          细胞培养操作规程:
          一.培养基及培养冻存条件准备:
          1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号21875-091),90%;优质胎牛血清,10%。
          2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。
          3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。
          二.细胞处理:
          1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
          2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
          对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
          方法一:收集细胞,1000RPM,常温条件下离心5分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
          下列是公司正在促销产品:

          小鼠血小板衍化生长因子 -B(mouse PDGF-AB)   作用:   ELISA   规格:   96T   美国 R&D     Ilaprazole  172152-36-2  中文名:艾普拉唑  分子式:C19H18N4O2S 

          小鼠血小板衍化生长因子 (mouse PDGF-AA)   作用:   ELISA   规格:   96T   美国 R&D  Ilaprazole  172152-36-2  中文名:艾普拉唑  分子式:C19H18N4O2S  度:98.0%   

          小鼠血小板相关抗体IgG(mouse PAIgG)   作用:   ELISA   规格:   48T/96T   进口分装     Dehydroadynerigenin digitaloside  52628-62-3  中文名:  分子式:C30H42O8 

          小鼠血小板相关抗体IgG   英文名称:   platelet-associated aibody IgG   规格:   48T/96T   英文缩写:   PAIgG  m-Nitrohydrocinnamic acid  中文名:  分子式:C9H9NO4  度:98.0%

          小鼠血小板生长因子受体α(mouse PDGF sRα)   作用:   ELISA   规格:   48T/96T   进口分装     Mefenamic acid  61-68-7  中文名:甲灭酸  分子式:C15H15NO2

          小鼠雌二醇受体elisa试剂盒   小鼠雌二醇受体试剂盒   规格型号:96T/48T   小鼠雌二醇受体试剂盒,规格型号:96T/48T,来源:elisa试剂盒(进口分装),产品别名:小鼠雌二醇受体试剂盒、小鼠雌二醇受体eisa试剂盒   保存条件:2-8   保质期:6个月。     Citrostadienol  中文名:柠檬二烯醇  分子式:C30H50O 

          小鼠雌二醇受体(ER)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装  Citrostadienol  474-40-8  中文名:柠檬二烯醇  分子式:C30H50O 

          小鼠雌二醇受体(ER)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Deflazacort  中文名:地夫可特  分子式:C25H31NO6 

          小鼠雌二醇(mouse E2)   作用:   ELISA   规格:   48T/96T   进口分装  Fludarabine  中文名:氟达拉宾  分子式:C10H12FN5O4 

          小鼠雌二醇(E2)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装  Citreorosein  中文名:ω-羟基大黄素  分子式:C15H10O6  度:97.0%

          兔干扰素-β(rabbit IFN-β)   作用:   ELISA   规格:   48T/96T   进口分装  5-Benzyl D-glutamate  中文名:D-谷氨酸5-苯甲酯  分子式:C12H15NO4  度:98.0%

          兔干扰素-r(rabbit IFN-r)   作用:   ELISA   规格:   48T/96T   进口分装     5-Benzyl D-glutamate  中文名:D-谷氨酸5-苯甲酯  分子式:C12H15NO4 

          兔干扰素-a(rabbit IFN-a)   作用:   ELISA   规格:   48T/96T   进口分装  5-Benzyl L-glutamate  1676-73-9  中文名:L-谷氨酸5-苄酯  分子式:C12H15NO4 

          兔肝细胞生长因子(rabbit HGF)   作用:   ELISA   规格:   48T/96T   进口分装  5-[Bis(2-hydroxyethyl)amino]-1-methyl-1H-benzimidazole-2-butanoic acid ethyl ester  3543-74-6  中文名:  分子式:C18H27N3O4 

          兔分泌型球蛋白Aelisa试剂盒   兔分泌型球蛋白A试剂盒   规格型号:96T/48T   兔分泌型球蛋白A试剂盒,规格型号:96T/48T,来源:elisa试剂盒(进口分装),产品别名:兔分泌型球蛋白A试剂盒、兔分泌型球蛋白A elisa试剂盒   保存条件:2-8   保质期:6个月。     4-Hydroxy-2-(3-methoxypropyl)-3,4-dihydro-2H-thieno[3,2-e][1,2]thiazine-6-sulfonamide 1,1-dioxide  中文名:  分子式:C10H16N2O6S3

          Testosterone undecanoate  5949-44-0  中文名:十一酸睾酮  分子式:C30H48O3  度:98.0%  关键词:    小鼠抑制素A   英文名称:   Insulin A   规格:   48T/96T   英文缩写:   Inhibin A

          Testosterone isocaproate  15262-86-9  中文名:异己酸睾酮  分子式:C25H38O3  度:98.0%  关键词:    小鼠抑制素B   英文名称:   Insulin B   规格:   48T/96T   英文缩写:   Inhibin B

          Testosterone enanthate  315-37-7  中文名:庚酸睾酮  分子式:C26H40O3  度:98.0%  关键词:    小鼠干扰素诱导蛋白IP-10   英文名称:   induced protein 10   规格:   48T/96T   英文缩写:   IP-10

          Testosterone decanoate  5721-91-5  中文名:癸酸睾酮  分子式:C29H46O3  度:98.0%  关键词:    小鼠8异前列腺素   英文名称:   8-isoprostane F2α   规格:   48T/96T   英文缩写:   8-iso-PG

          Testosterone benzoate  2088-71-3  中文名:17-安息香酸雄烯醇酮  分子式:C26H32O3  度:98.0%  关键词:    小鼠乙型肝炎表面抗原elisa试剂盒   小鼠乙型肝炎表面抗原试剂盒   规格型号:96T/48T   小鼠乙型肝炎表面抗原试剂盒,规格型号:96T/48T,来源:elisa试剂盒(进口分装),产品别名:小鼠乙型肝炎表面抗原试剂盒、小鼠乙型肝炎表面抗原elisa试剂盒   保存条件:2-8   保质期:6个月。

          实验报告:

          一、分离与培养:
              1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,后将组织剪成1mm3左右大小;
              2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
              3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织完全被消化;
              4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
              5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
          大鼠脉络膜血管细胞保存二、免疫荧光鉴定:
              1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;
              2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
              3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
              4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
              5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;
              6、用PBS冲洗3次,每次10min,后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

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