小鼠皮下脂肪细胞保存

细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

以下是订购信息：

小鼠皮下脂肪细胞【Mouse Fat: Normal Subcutaneous Fat Cells】
     产品描述：公司提供的原代细胞均来自新鲜组织，公司提供的小鼠原代细胞均来自新鲜组织，用于培养该细胞的组织采集是根据标准方案进行。细胞的培养采用公司PrimaCellTM原代细胞培养试剂盒来优化目的细胞生长条件，以降低杂细胞的污染，同时保证质量的稳定。在公司生物技术部标准的操作流程下，原代细胞可以保持分化状态，进而可以用于评估体外药物模型系统和调节特定基因的遗传功能。
 冷冻保存细胞之方法？
冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ （-20 ℃30 分钟*） → -80 ℃16~18 小时（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 长期储存。
冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase长期储存。*-20 ℃不可超过1 小时， 以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

 

培养操作：
产品仅供科研1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜（或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并 检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。      
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分 变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。  
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；
1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，细胞变圆 脱 落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。
2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞，根据细胞数量加 入血 清和 DMSO，轻轻混匀，DMSO 终浓度为 10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液，注意冻 存管做好标识。
3. 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

实验报告：

小鼠皮下脂肪细胞保存一、分离与培养：
    1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，后将组织剪成1mm3左右大小；
    2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
    3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织完全被消化；
    4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
    5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
二、免疫荧光鉴定：
    1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；
    2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
    3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
    4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
    5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；
    6、用PBS冲洗3次，每次10min，后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

下列是公司正在促销产品：

氧化酶   英文名称：   Human Xahione oxidase   规格：   48T/96T   英文缩写：   XOD  Androst-5-ene-3β,17β-diol 3,17-diacetate  中文名：雄甾-5-烯-3β,17β-二醇 3,17-二乙酸酯  分子式：C23H34O4  度：98.0%

氧化低密度脂蛋白   英文名称：   oxidized low density lipoprotein   规格：   48T/96T   英文缩写：   OxLDL  Qingyangshengenin 3-O-β-D-cymaropyranosyl-(1→4)-β-D-digitoxopyranoside  1186628-87-4  中文名：  分子式：C41H58O14 

羊孕激素/孕(PROG)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装           α-Spinasterol acetate  4651-46-1  中文名：α-菠甾醇乙酸酯  分子式：C31H50O2 

羊阶段特异性表面抗原-1elisa试剂盒   羊阶段特异性表面抗原-1试剂盒   规格型号：96T/48T   羊阶段特异性表面抗原-1试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：羊阶段特异性表面抗原-1试剂盒、羊阶段特异性表面抗原-1eisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。  Piracetam  中文名：吡拉西坦  分子式：C6H10N2O2  度：98.0%

羊促卵泡素(FSH)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装  Pioglitazone   中文名：盐酸吡格列酮  分子式：C19H21ClN2O3S  度：98.0%

小鼠基质金属蛋白酶抑制剂-1(mouse TIMP-1)   作用：   ELISA   规格：   48T/96T   进口分装  DL-Alanyl-DL-Mine  中文名：DL-丙氨酰-DL-蛋氨酸  分子式：C8H16N2O3S  度：99.0%

小鼠基质金属蛋白酶抑制剂-1   英文名称：   Tissue inhibitors of metalloproteinases 1   规格：   48T/96T   英文缩写：   TIMP-1  n-Butyl β-D-fructofuranoside  80971-60-4  中文名：基-β-D-果糖苷  分子式：C10H20O6  度：97.0%  关键词： 

小鼠基质金属蛋白酶elisa试剂盒   小鼠基质金属蛋白酶试剂盒   规格型号：96T/48T   小鼠基质金属蛋白酶试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：小鼠基质金属蛋白酶试剂盒、小鼠基质金属蛋白酶eisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。  Ethyl β-D-xylopyranoside  6743-62-0  中文名：  分子式：C7H14O5  度：97.5%  关键词： 

小鼠基质金属蛋白酶9/明胶酶B(MMP-9/GelatinaseB)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装  D-Mannitol diacetonide  中文名：  分子式：C12H22O6 

小鼠基质金属蛋白酶-9(mouse MMP-9)   作用：   ELISA   规格：   48T/96T   进口分装     Dioxopromethazine   15374-15-9  中文名：盐酸二氧丙嗪  分子式：C17H21ClN2O2S

兔子可溶性内皮细胞蛋白C受体elisa试剂盒   兔子可溶性内皮细胞蛋白C受体试剂盒   规格型号：96T/48T   兔子可溶性内皮细胞蛋白C受体试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：兔子可溶性内皮细胞蛋白C受体试剂盒、兔子可溶性内皮细胞蛋白C受体elisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。  8-Amino-2-naphthalenesulfonic acid  119-28-8  中文名：8-氨基-2-萘磺酸  分子式：C10H9NO3S  度：98.0%   

兔子可溶性内皮细胞蛋白C受体(sEPCR)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装  8-Azaguanine  中文名：8-氮杂鸟嘌呤  分子式：C4H4N6O  度：98.0%

兔子可溶性内皮细胞蛋白C受体(sEPCR)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装  1-(4-Fluorobenzyl)-2-chlorobenzimidazole  中文名：  分子式：C14H10ClFN2  度：98.0%

兔子可溶性细胞间粘附分子1elisa试剂盒   兔子可溶性细胞间粘附分子1试剂盒   规格型号：96T/48T   兔子可溶性细胞间粘附分子1试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：兔子可溶性细胞间粘附分子1试剂盒、兔子可溶性细胞间粘附分子1 elisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。  7α-Hydroxysitosterol  中文名：7α-羟基谷甾醇  分子式：C29H50O2  度：95.0%

兔子可溶性细胞间粘附分子1elisa试剂盒   兔子可溶性细胞间粘附分子1试剂盒   规格型号：96T/48T   兔子可溶性细胞间粘附分子1试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：兔子可溶性细胞间粘附分子1试剂盒、兔子可溶性细胞间粘附分子1 elisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。  7-Oxo-β-sitosterol  中文名：7-氧代-β-谷甾醇  分子式：C29H48O2  度：98.0%

大鼠叠氮胸苷(AZT)ELISAKit   ELISA.   96T/48T              Tofacitinib   540737-29-9  中文名：枸橼酸托法替尼  分子式：C22H28N6O8 

大鼠第八因子相关抗原(FⅧAg)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Toltrazuril  中文名：托曲珠利  分子式：C18H14F3N3O4S 

大鼠雌激素受体(ER)ELISAKit   ELISA.   96T/48T              Tiotropium bromide  136310-93-5  中文名：噻托溴铵  分子式：C19H22NO4S2 

大鼠补体片断5a(C5a)ELISAKit   ELISA.   96T/48T              Tokinolide B  112966-16-2  中文名：  分子式：C24H28O4 

大鼠补体蛋白3(C3)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Tofacitinib   540737-29-9  中文名：枸橼酸托法替尼  分子式：C22H28N6O8  度：98.0%