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          人前脂肪细胞说明书

          人前脂肪细胞说明书

          产品时间:2020-07-16

          访问量:153

          厂商性质:经销商

          生产地址:进口、国产

          简要描述:
          人前脂肪细胞说明书在实验过程中,根据要求可始终保持细胞活力,并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况,包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
          品牌其他品牌CAS详见说明书
          分子式详见说明书纯度详见说明书
          分子量详见说明书货号GOY-Y3298
          规格5×105/瓶供货周期现货
          主要用途公司产品仅用于科研应用领域化工

          以下是订购信息:

          产品名称英文名称货号
           人前脂肪细胞说明书 Human Adipose: Preadipocytes GOY-Y3298

          人前脂肪细胞【Human Adipose: Preadipocytes
               产品描述:公司提供的原代细胞均来自新鲜组织,公司提供的人源原代细胞均来自新鲜组织,用于培养该细胞的组织采集是根据标准方案进行。细胞的培养采用公司PrimaCellTM原代细胞培养试剂盒来优化目的细胞生长条件,以降低杂细胞的污染,同时保证质量的稳定。在公司生物技术部标准的操作流程下,原代细胞可以保持分化状态,进而可以用于评估体外药物模型系统和调节特定基因的遗传功能。产品仅供科研
           冷冻保存细胞之方法?
          冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ (-20 ℃30 分钟*) → -80 ℃16~18 小时(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 长期储存。
          冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase长期储存。*-20 ℃不可超过1 小时, 以防止冰晶过大,造成细胞大量死亡,亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。

           

          培养操作:
          1)复苏细胞:将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻,加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟,弃去上清液,补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜(或将 细胞悬液加入 10cm 皿中,加入约 8ml 培养基,培养过夜)。第二天换液并 检查细胞密度。
          2)细胞传代:如果细胞密度达 80%-90%,即可进行传代培养。      
          1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
          2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分 变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。  
          3. 按 6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟,弃去上清液,补加 1-2mL 培养液后吹匀。
          4. 将细胞悬液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
          3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类;
          1. 细胞冻存时,弃去培养基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶,细胞变圆 脱 落后,加入 1ml 含血清的培养基终止消化,可使用血球计数板计数。
          2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞,根据细胞数量加 入血 清和 DMSO,轻轻混匀,DMSO 终浓度为 10%,细胞密度不低于1x106/ml,每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液,注意冻 存管做好标识。
          3. 将冻存管置于程序降温盒中,放入-80 度冰箱,2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
          细胞培养操作规程:
          一.培养基及培养冻存条件准备:
          1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号21875-091),90%;优质胎牛血清,10%。
          2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。
          3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。
          二.细胞处理:
          1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
          2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
          对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
          方法一:收集细胞,1000RPM,常温条件下离心5分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
          下列是公司正在促销产品:

          猪肺表面活性物质相关蛋白A(SP-A)ELISAKit   ELISA.   96T/48T              Stigmasta-4,22,25-trien-3-one  中文名:  分子式:C29H44O 

          猪端粒酶(TE)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装  Sulfaquinoxaline  59-40-5  中文名:磺胺喹噁啉  分子式:C14H12N4O2S  度:98.0%  关键词: 

          猪端粒酶(TE)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Tanshinone I  中文名:  分子式:C18H12O3  度:96.0%

          猪凋亡相关因子elisa试剂盒   猪凋亡相关因子试剂盒   规格型号:96T/48T   猪凋亡相关因子试剂盒,规格型号:96T/48T,来源:elisa试剂盒(进口分装),产品别名:猪凋亡相关因子试剂盒、猪凋亡相关因子eisa试剂盒   保存条件:2-8   保质期:6个月。  Tanshinone IIA  中文名:丹参酮IIA  分子式:C19H18O3  度:98.5%

          猪凋亡相关因子(FAS/CD95)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装           Sulfaquinoxaline  59-40-5  中文名:磺胺喹噁啉  分子式:C14H12N4O2S

          小鼠苹果酸酶   英文名称:   Mouse Malic Enzyme   规格:   48T/96T   英文缩写:   ME  Diphenhydramine   147-24-0  中文名:盐酸苯海拉明  分子式:C17H22ClNO 

          小鼠皮质醇elisa试剂盒   小鼠皮质醇试剂盒   规格型号:96T/48T   小鼠皮质醇试剂盒,规格型号:96T/48T,来源:elisa试剂盒(进口分装),产品别名:小鼠皮质醇试剂盒、小鼠皮质醇elisa试剂盒   保存条件:2-8   保质期:6个月。  Ganciclovir  中文名:更昔洛韦  分子式:C9H13N5O4  度:98.0%

          小鼠皮质醇(Coisol)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Citreorosein  481-73-2  中文名:ω-羟基大黄素  分子式:C15H10O6 

          小鼠皮质/上腺(CO)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装           Gefitinib  184475-35-2  中文名:吉非替尼  分子式:C22H24ClFN4O3 

          小鼠皮质(mouse Coicosterone)   作用:   ELISA   规格:   48T/96T   进口分装  Benzoin methyl ether  3524-62-7  中文名:安息香甲基醚  分子式:C15H14O2

          细菌营养肉汤500毫升  2-Acetamidothiazole  2719-23-5  中文名:2-乙酰氨基噻唑  分子式:C5H6N2OS  度:99.0%  关键词: 

          细菌营养琼脂平板50  2-Acetyl-3-ethylpyrazine  32974-92-8  中文名:2-乙酰基-3-乙基吡嗪  分子式:C8H10N2O  度:99.0%  关键词: 

          细菌印度墨负性染色试剂盒50  2-Acetylfluorene  781-73-7  中文名:2-乙酰芴  分子式:C15H12O  度:98.0%  关键词: 

          细菌异化型盐还原酶活性比色法定量检测试剂盒20  2-Amino-2'-chloro-5-nitro benzophenone  2011-66-7  中文名:2-氨基-5-硝基-2'-氯二苯甲酮  分子式:C13H9ClN2O3  度:98.0%  关键词: 

          细菌乙酰甲基原醇V-P检测试剂盒20  2-Amino-3-chloro-1,4-naphthoquinone  2797-51-5  中文名:2-氨基-3--1,4-萘醌  分子式:C10H6ClNO2  度:99.0%  关键词:

          人视黄醇结合蛋白4(RBP-4)ELISAKit   ELISA.   96T/48T              Thiamphenicol  15318-45-3  中文名:甲砜霉素  分子式:C12H15Cl2NO5S 

          人生长激素受体(GHR)酶联吸附测定试剂盒   Human GHR (Growth Hormone Receptor) ELISA Kit                  3,5-Di-O-caffeoylquinic acid  中文名:异绿原酸分子式:C25H24O12 

          人三0酸鸟苷环水解酶1   英文名称:   Human Guanosine 5-iphosphate Cyclohydrolase 1   规格:   48T/96T   英文缩写:   GCH1  3-O-Acetylandrostenone hydrazone  中文名:3-O-乙酰基雄酮腙  分子式:C21H32N2O2 

          人乳酸脱氢酶   英文名称:   Human Lactate Dehydrogenase   规格:   48T/96T   英文缩写:   LDH  3-Acetyl-2,5-dichlorothiophene  36157-40-1  中文名:  分子式:C6H4Cl2OS 

          人溶菌酶   英文名称:   lysozyme   规格:   48T/96T   英文缩写:   LZM/LYS  3-[4-[(2-Chloro-5-iodophenyl)methyl]phenoxy]tetrahydro-furan  中文名:  分子式:C17H16ClIO2  度:98.0%

          实验报告:

          人前脂肪细胞说明书一、分离与培养:
              1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,后将组织剪成1mm3左右大小;
              2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
              3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织完全被消化;
              4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
              5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
          二、免疫荧光鉴定:
              1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;
              2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
              3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
              4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
              5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;
              6、用PBS冲洗3次,每次10min,后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

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