人表皮角质形成细胞保存

以下是订购信息：

人表皮角质形成细胞【Human Skin: Normal Epidermal Keratinocytes】
     产品描述：公司提供的原代细胞均来自新鲜组织，公司提供的人源原代细胞均来自新鲜组织，用于培养该细胞的组织采集是根据标准方案进行。细胞的培养采用公司PrimaCellTM原代细胞培养试剂盒来优化目的细胞生长条件，以降低杂细胞的污染，同时保证质量的稳定。在公司生物技术部标准的操作流程下，原代细胞可以保持分化状态，进而可以用于评估体外药物模型系统和调节特定基因的遗传功能。
 冷冻保存细胞之方法？
冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ （-20 ℃30 分钟*） → -80 ℃16~18 小时（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 长期储存。
冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase长期储存。*-20 ℃不可超过1 小时， 以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

 

实验报告：

一、分离与培养：产品仅供科研
    1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，后将组织剪成1mm3左右大小；
    2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
    3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织完全被消化；
    4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
    5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
二、免疫荧光鉴定：
    1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；
    2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
    3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
    4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
    5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；
    6、用PBS冲洗3次，每次10min，后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

下列是公司正在促销产品：

猪活化素A(ACV-A)ELISAKit   ELISA.   96T/48T              Sunitinib malate  341031-54-7  中文名：苹果酸舒尼替尼  分子式：C26H33FN4O7 

猪坏死因子αelisa试剂盒   猪坏死因子α试剂盒   规格型号：96T/48T   猪坏死因子α试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：猪坏死因子α试剂盒、猪坏死因子αeisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。     Sarsasapogenin  126-19-2  中文名：菝葜皂苷元  分子式：C27H44O3 

猪坏死因子α(TNF-α)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装  Sulfadiazine  中文名：磺胺嘧啶  分子式：C10H10N4O2S  度：99.0%

猪坏死因子α(TNF-α)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Sulfaguanidine  中文名：磺胺脒  分子式：C7H10N4O2S  度：99.0%

猪红细胞生成素(EPO)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装  Sulfamethazine  中文名：磺胺二甲嘧啶  分子式：C12H14N4O2S  度：99.0%

小鼠羟甲基赖酸(mouse CML)   作用：   ELISA   规格：   48T/96T   进口分装  Dioscin  19057-60-4  中文名：薯蓣皂苷  分子式：C45H72O16  度：98.5%  关键词：  溶血; 细胞毒; 抗真菌; 薯蓣属; 螺甾烷; 中药对照品; 中药标准品; 植物提取物; 天然产物; 天然产物库

小鼠强啡肽(Dyn)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装  Gliclazide  中文名：格列齐特  分子式：C15H21N3O3S 

小鼠前心肽elisa试剂盒   小鼠前心肽试剂盒   规格型号：96T/48T   小鼠前心肽试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：小鼠前心肽试剂盒、小鼠前心肽eisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。     Glycoursodeoxycholic acid  64480-66-6  中文名：甘氨熊脱氧胆酸  分子式：C26H43NO5 

小鼠前心肽(Pro-ANP)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装  Gliclazide  21187-98-4  中文名：格列齐特  分子式：C15H21N3O3S  度：98.0%  关键词： 

小鼠前心肽(Pro-ANP)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Glaucogenin C mono-D-thevetoside  中文名：  分子式：C28H40O9  度：98.0%

线粒体复合物II蛋白共沉淀分析试剂盒5次  2-Amino-2'-nitrodiphenyl sulfide  中文名：2-氨基-2'-硝基二苯基硫醚  分子式：C12H10N2O2S  度：98.0%

线粒体复合物II蛋白表达ELISA定量检测试剂盒25次  2-Amino-3-methylbenzoic acid  4389-45-1  中文名：2-氨基-3-甲基苯甲酸  分子式：C8H9NO2  度：98.0%   

线粒体复合物III蛋白共沉淀分析试剂盒5次  2-Amino-4-methylbenzothiazole  1477-42-5  中文名：2-氨基-4-甲基苯并噻唑  分子式：C8H8N2S  度：98.0%   

线粒体复合物III蛋白表达ELISA定量检测试剂盒25次  2-Amino-5-nitrobenzophenone  中文名：2-氨基-5-硝基二苯甲酮  分子式：C13H10N2O3  度：98.0%

线粒体促凋亡蛋白 (SMAC)   作用：   ELISA   规格：   48T/96T   进口分装  Atrazine  1912-24-9  中文名：阿特拉津  分子式：C8H14ClN5  度：98.0%  关键词：

人信号素4D(SEMA4D)酶联吸附测定试剂盒   Human SEMA4D (Semaphorin 4D) ELISA Kit                    3,3-Dimethylacrylic acid  中文名：千里光酸  分子式：C5H8O2 

人心肌锚蛋白重复域1elisa试剂盒   人心肌锚蛋白重复域1试剂盒   规格型号：96T/48T   人心肌锚蛋白重复域1试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：人心肌锚蛋白重复域1试剂盒、人心肌锚蛋白重复域1 elisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。     3-(Boc-Amino)piperidine  中文名：  分子式：C10H20N2O2 

人相关抗原(TAA)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装  2-Cyclopropyl-4-(4-fluorophenyl)-quinolyl-3-methanol  中文名：  分子式：C19H16FNO  度：98.0%

人腺苷三0酸结合盒转运体G1(ABCG1)酶联吸附测定试剂盒   Human ABCG1 (ATP Binding Cassette anspoer G1) ELISA Kit  2-n-Propyl-4-methyl-6-(1-methylbenzimidazole-2-yl)benzimidazole  中文名：  分子式：C19H20N4  度：98.0%

人腺苷三0酸结合盒转运体A1(ABCA1)酶联吸附测定试剂盒   Human ABCA1(ATP Binding Cassette anspoer A1) ELISA Kit                 2-n-Propyl-4-methyl-6-(1-methylbenzimidazole-2-yl)benzimidazole  中文名：  分子式：C19H20N4

人表皮角质形成细胞保存培养操作：

1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜（或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并 检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。      
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分 变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。  
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；
1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，细胞变圆 脱 落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。
2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞，根据细胞数量加 入血 清和 DMSO，轻轻混匀，DMSO 终浓度为 10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液，注意冻 存管做好标识。
3. 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。