品牌 | 其他品牌 | CAS | 详见说明书 |
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分子式 | 详见说明书 | 纯度 | 详见说明书 |
分子量 | 详见说明书 | 货号 | GOY-Y3292 |
规格 | 5×105/瓶 | 供货周期 | 现货 |
主要用途 | 公司产品仅用于科研 | 应用领域 | 化工 |
以下是订购信息:
产品名称 | 英文名称 | 货号 |
成人皮肤成纤维细胞培养 | Human Skin: Normal Dermal Fibroblasts | GOY-Y3292 |
成人皮肤成纤维细胞【Human Skin: Normal Dermal Fibroblasts】
产品描述:公司提供的原代细胞均来自新鲜组织,公司提供的人源原代细胞均来自新鲜组织,用于培养该细胞的组织采集是根据标准方案进行。细胞的培养采用公司PrimaCellTM原代细胞培养试剂盒来优化目的细胞生长条件,以降低杂细胞的污染,同时保证质量的稳定。在公司生物技术部标准的操作流程下,原代细胞可以保持分化状态,进而可以用于评估体外药物模型系统和调节特定基因的遗传功能。产品仅供科研
冷冻保存细胞之方法?
冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ (-20 ℃30 分钟*) → -80 ℃16~18 小时(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 长期储存。
冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase长期储存。*-20 ℃不可超过1 小时, 以防止冰晶过大,造成细胞大量死亡,亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
培养操作:
1)复苏细胞:将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻,加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟,弃去上清液,补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜(或将 细胞悬液加入 10cm 皿中,加入约 8ml 培养基,培养过夜)。第二天换液并 检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达 80%-90%,即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分 变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟,弃去上清液,补加 1-2mL 培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类;
1. 细胞冻存时,弃去培养基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶,细胞变圆 脱 落后,加入 1ml 含血清的培养基终止消化,可使用血球计数板计数。
2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞,根据细胞数量加 入血 清和 DMSO,轻轻混匀,DMSO 终浓度为 10%,细胞密度不低于1x106/ml,每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液,注意冻 存管做好标识。
3. 将冻存管置于程序降温盒中,放入-80 度冰箱,2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
细胞培养操作规程:
一.培养基及培养冻存条件准备:
1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号21875-091),90%;优质胎牛血清,10%。
2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。
3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。
二.细胞处理:
1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
方法一:收集细胞,1000RPM,常温条件下离心5分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
下列是公司正在促销产品:
猪基质金属蛋白酶抑制因子1(TIMP-1)ELISAKit ELISA. 96T/48T Sucrose 中文名: 分子式:C12H22O11 度:%
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猪基质金属蛋白酶9(MMP-9)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装 Succinic acid 中文名: 分子式:C4H6O4
猪基质金属蛋白酶9(MMP-9)ELISAKit ELISA. 96T/48T Sucrose 中文名: 分子式:C12H22O11
猪肌球蛋白轻链0酸酶(MLCP)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装 Succinic acid 110-15-6 中文名: 分子式:C4H6O4 度:% 关键词: 增香剂; 中药对照品; 中药标准品; 植物提取物; 天然产物; 天然产物库
小鼠羟脯酸elisa试剂盒 小鼠羟脯酸试剂盒 规格型号:96T/48T 小鼠羟脯酸试剂盒,规格型号:96T/48T,来源:elisa试剂盒(进口分装),产品别名:小鼠羟脯酸试剂盒、小鼠羟脯酸eisa试剂盒 保存条件:2-8℃ 保质期:6个月。 Mannitol 69-65-8 中文名:甘露醇 分子式:C6H14O6 度:98.5% 关键词: 利尿剂; 脱水剂; 中药对照品; 中药标准品; 植物提取物; 天然产物; 天然产物库
小鼠羟脯酸(mouse HYP) 作用: ELISA 规格: 48T/96T 进口分装 Neochlorogenic acid 906-33-2 中文名:新绿原酸 分子式:C16H18O9 度:98.0% 关键词: 抗艾滋病病毒; 抗病毒; 保肝; 莽草酸; 中药对照品; 中药标准品; 植物提取物; 天然产物; 天然产物库
小鼠羟脯酸(Hyp)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装 Gliclazide 中文名:格列齐特 分子式:C15H21N3O3S 度:98.0%
小鼠羟脯酸(Hyp)ELISAKit ELISA. 96T/48T Benzoin oxime 中文名:安息香肟 分子式:C14H13NO2 度:98.0%
小鼠羟甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶 英文名称: Mouse 3-hydroxy-3-methylglaryl CoA reductase 规格: 48T/96T 英文缩写: HMG-CoA Daturataturin A 133360-51-7 中文名: 分子式:C34H48O10
线粒体复合物V蛋白表达ELISA定量检测试剂盒25次 2-[(6-Chloro-3,4-dihydro-3-methyl-2,4-dioxo-1(2H)-pyrimidinyl)methyl]benzonitrile 865758-96-9 中文名: 分子式:C13H10ClN3O2 度:98.0% 关键词:
线粒体复合物I蛋白共沉淀分析试剂盒5次 2-[(Acetylthio)methyl]-phenylpropionic acid 中文名: 分子式:C12H14O3S 度:98.0%
线粒体复合物I蛋白表达ELISA定量检测试剂盒25次 22-Dehydroclerosteryl acetate 中文名: 分子式:C31H48O2 度:93.0%
线粒体复合物IV蛋白共沉淀分析试剂盒5次 2-Acetonaphthone 中文名:2'-萘乙酮 分子式:C12H10O 度:98.0%
线粒体复合物IV蛋白表达ELISA定量检测试剂盒25次 2-Allylphenol 中文名:2-烯丙基酚 分子式:C9H10O 度:98.0%
人内皮细胞生长因子受体1(VEGFR-1/Flt1)ELISAKit ELISA. 96T/48T 2-Amino-9H-fluoren-9-one 中文名:2-氨基-9H-芴-9-酮 分子式:C13H9NO
人紧张素原elisa试剂盒 人紧张素原试剂盒 规格型号:96T/48T 人紧张素原试剂盒,规格型号:96T/48T,来源:elisa试剂盒(进口分装),产品别名:人紧张素原试剂盒、人紧张素原eisa试剂盒 保存条件:2-8℃ 保质期:6个月。 9-Hydroxy-α-lapachone 中文名: 分子式:C15H14O4
人紧张素Ⅱ受体2(AT2R)ELISAKit ELISA. 96T/48T Tiagabine 145821-59-6 中文名:盐酸噻加宾 分子式:C20H26ClNO2S2 度:98.0% 关键词:
人紧张素Ⅱ受体1(ANGⅡR-1)ELISAKit ELISA. 96T/48T Tiagabine 145821-59-6 中文名:盐酸噻加宾 分子式:C20H26ClNO2S2
人星状病毒(HastV)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法) 48T Withaphysalin A 中文名: 分子式:C28H34O6
实验报告:
一、分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,后将组织剪成1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织完全被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
成人皮肤成纤维细胞培养二、免疫荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
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