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          鹿胰岛素样生长因子结合蛋白3(IGFBP-3)elisa试剂盒说明书

          发布时间:2022/3/18   点击次数:23
           
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          鹿胰岛素样生长因子结合蛋白3(IGFBP-3)elisa试剂盒说明书


          ELISA法是免疫诊断中的一项新技术,现已成功地应用于多种病原微生物所引起的传染病、寄生虫病及非传染病等方面的免疫诊断。也已应用于大分子抗原和小分子抗原的定量测定,根据已经使用的结果,认为ELISA法具有灵敏、特异、简单、快速、稳定及易于自动化操作等特点。不仅适用于临床标本的检查,而且由于一天之内可以检查几百甚至上千份标本,因此,也适合于血清流行病学调查。本法不仅可以用来测定抗体,而且也可用于测定体液中的循环抗原,所以也是一种早期诊断的良好方法。因此ELISA法在生物医学各领域的应用范围日益扩大,可概括四个方面:


          1、免疫酶染色各种细胞内成份的定位。


          2、研究抗酶抗体的合成。


          3、显现微量的免疫沉淀反应。


          4、定量检测体液中抗原或抗体成份。


           组成 :


          试剂盒组成      48孔配置            96孔配置            保存


          说明书             1份                1份  


          封板膜          2片(48)          2片(96)   


          密封袋             1个                1个  


          酶标包被板        1×48             1×96            2-8℃保存


          标准品          0.3ml×6瓶         0.3ml×6瓶         2-8℃保存


          标准品稀释液    3ml×1瓶           6ml×1瓶           2-8℃保存


          检测抗体-HRP    5ml×1瓶           10ml×1瓶          2-8℃保存


          显色剂A液      3ml×1瓶           6ml×1瓶           2-8℃保存


          显色剂B液      3ml×1瓶           6ml×1瓶           2-8℃保存


          终止液          3ml×1瓶           6ml×1瓶           2-8℃保存


          20*洗涤缓冲液   25ml×1瓶          15ml×1瓶          2-8℃保存



          需自备的设备及试剂:


          1.450±10nm滤光片酶标仪(建议仪器使用前预热)


          2.高精度加样器及枪头:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL.


          3.Eppendorf 移液器.


          4.蒸馏水或去离子水.


          5.脱脂棉吸水纸.


          6.37℃恒温箱.


          7.100ml和1000ml量筒.


          8.准备若干个标准品稀释管.


           

          注意事项


          1.试剂准备:所有试剂都必须在使用前达到室温,使用后请立即按照说明书要求保存。实验操作中必须使用一次性吸头,避免交叉污染。


          2.加样:加样时,要控制加样速度,避免*孔与zui后一孔之见的时间间隔过大,否则将会导致不同的预孵育时间,从而影响实验的准确性以及重复性;一般加样时间控制在10分钟内,如果样本数量过多,可使用多道移液器。


          3.孵育:样品要在密闭的容器内进行孵育,严格按照说明书上规定的孵育时间和温度进行。


          4.洗涤:洗涤过程中反应孔中的残留的洗涤液应在滤纸上充分拍干,同时要消除板底残留的液体和手指痕迹,避免影响zui后的酶标仪读数。


          5.反应时间的控制:加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化(比如,10分钟左右),如果颜色较深,请提前加入终止液终止反应。


          6.建议实验前预测样品含量,如样品浓度过高,应对样品进行稀释,计算结果时乘以相应的稀释倍数。


          7.建议使用本试剂盒时先做预实验(即先做标准曲线,试用几个标本),如果对本试剂盒有任何疑问,可和所购经销商,如果因运输过程导致试剂盒失效,可要求调换,但概不承担产品本身以外的任何损失。


           

          操作步骤


          1. 取出试剂盒,于室温(20-25℃)放置15-30分钟。实验过程应在室温(20-25℃)内进行。


          2. 取出酶标板,按照标准品的次序分别加入50μl的标准品溶液于空白微孔中。


          3. 空白微孔中加入50μl的样品,空白对照加入50μl的蒸馏水;


          4. 在样品孔中加入10μl的生物素;(不含空白对照孔,切忌:生物素只加样品孔!)


          5. 在各孔中加入100μl的酶标记溶液;(不含空白对照孔)


          6. 将酶标板用封口胶密封后,37℃孵育反应 1小时;(在孵育箱中保持稳定的温度与湿度)


          7. 充分清洗酶标板3-5次,保持各孔有充足的水压;(浓缩洗涤液以1:100的比例与蒸馏水稀释)


          8. 酶标板洗涤后用吸水纸彻底拍干;


          9. 各孔加入显色剂A、B液各50μl;(不含空白对照孔)


          10. 20-25℃下避光反应15分钟;


          11.各孔加入50μl终止液,终止反应;


          结果判断


          1. 30分钟内在波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值;


          2. 以OD值为纵坐标,以标准品的浓度为横坐标,绘制曲线图;


          3. 根据样品的OD值查找对应的浓度范围;


           
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