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          转基因品系玉米MON832 PCR试剂盒检测步骤

          发布时间:2020-08-04   点击次数:257次

          转基因品系玉米MON832 PCR试剂盒检测步骤

          一、 试剂的准备
          从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振荡混匀后,10000rpm离心10s。
          设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
          试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
          荧光PCR反应液 14µL N×14µL
          酶混合物 1 µL N×1 µL
          总量 15 µL N×15µL
          (1) 计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10000rpm离心10s,向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液,向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬时离心10秒。
          7.2 qPCR反应条件
          将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
          推荐循环条件:
          1循环 50℃ for 2 min
          预变性 1循环 95℃ for 10 min
          PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
          60℃ for 60 sec
          在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为FAM。淬灭基团:NONE,请勿选择ROX参比荧光。

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